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產(chǎn)品品牌
： REAGEN -
產(chǎn)品貨號
： RN065FP -
產(chǎn)品規(guī)格
： 50/100T -
產(chǎn)品適用
： 對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進(jìn)行檢測，適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。 -
產(chǎn)地來源
： 深圳 -
保質(zhì)期
： 12個月
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：流感病毒H5N1亞型核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規(guī)格】
50人份/盒
【預(yù)期用途】
對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進(jìn)行檢測，適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）結(jié)合Taqman技術(shù)，對禽流感病毒H5N1亞型的特異性核酸片段進(jìn)行熒光PCR檢測。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規(guī)格 | 數(shù)量 | ||
PCR反應(yīng)液 |
884μL /管 |
1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、緩沖體系 |
酶混合液 | 156μL /管 | 1管 | Taq酶、MMLV酶 |
陽性對照 | 200μL /管 | 1管 | 含目的片段的質(zhì)粒 |
陰性對照 | 500μL /管 | 1管 | 無核酸酶水 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個月。本產(chǎn)品反復(fù)凍融應(yīng)不超過5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。
【樣本要求】
1. 適用樣本
咽拭子：應(yīng)使用專用采樣拭子，適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位；迅速將拭子放入標(biāo)本采集管中，旋緊管蓋并密封，以防干燥。
全血：疑似感染動物的靜脈血2mL至EDTA-2Na抗凝管，8000rpm離心2min，取適量上清液于1.5mL滅菌離心管中。
2. 樣本運輸和保存
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標(biāo)本運送應(yīng)采用2~8℃冰袋運輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
取待測樣本200ul，按照核酸提取試劑盒說明書進(jìn)行核酸提取。
2. 試劑配置（在準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行，與擴增區(qū)分開，冰上操作）
注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，確保試劑完全離心至管底，否則會出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。若有N個待檢測樣本，則需配置N+2擴增反應(yīng)（待檢樣本數(shù)N+1個陽性質(zhì)控品+1個陰性質(zhì)控品），按下表要求進(jìn)行擴增反應(yīng)液的配制，配制完成后充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管20μL分裝至0.2 ml PCR管中，并做好標(biāo)記，擴增反應(yīng)液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
N人份(μL) | |
PCR反應(yīng)液 | （N+2）×17 |
酶混合液 | （N+2）×3 |
總量 | （N+2）×20 |
3. 加樣（在樣品處理區(qū)進(jìn)行，冰上操作）
按陰性質(zhì)控品、待測樣品、陽性質(zhì)控品的加樣順序，分別取5μL，加入至已分裝擴增反應(yīng)液的八聯(lián)管中，反應(yīng)總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心后置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應(yīng)（在擴增區(qū)進(jìn)行）
選擇FAM通道檢測H5亞型，選擇HEX通道檢測N1亞型。按以下擴增程序表設(shè)置PCR擴增參數(shù)。
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | |
1 | 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 10min | 1 |
2 | 預(yù)變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測 | 55℃ | 30 sec | |
報告熒光：FAM、HEX；淬滅熒光：NONE。 | ||||
5.質(zhì)量控制
FAM通道Ct值 | HEX通道Ct值 | |
陰性對照 | UNDET | UNDET |
陽性對照 | ≤35 | ≤35 |
以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進(jìn)行
6.結(jié)果判讀
反應(yīng)結(jié)束自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據(jù)實際情況自行調(diào)整，Start 值可以在3~15、End 值可設(shè)在5~20，調(diào)整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊Analysis 自動獲得分析結(jié)果，在Report 界面觀看結(jié)果。
試驗結(jié)果判斷
FAM通道 | HEX通道 | ||
Ct值>40 | Ct值≤40 | Ct值>40 | Ct值≤40 |
H5亞型陰性 | H5亞型陽性 | N1亞型陰性 | N1亞型 陽性 |
【檢驗結(jié)果的解釋】
1．實驗室環(huán)境污染，試劑污染，樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果，如陰性對照檢測為陽性，則需做進(jìn)一步實驗來確認(rèn)是哪類污染。如為試劑污染，需開封新的試劑盒再次進(jìn)行實驗；如為樣品交叉污染，應(yīng)重復(fù)實驗；如為實驗室環(huán)境污染，需對實驗室進(jìn)行徹底清潔或更換實驗室再進(jìn)行實驗。
2．試劑運輸、保存或配制不當(dāng)會引起試劑檢測性能下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如陽性對照檢測為陰性，應(yīng)開封新的試劑盒再進(jìn)行實驗。
【檢測方法的局限性】
1. 該試劑盒僅為定性產(chǎn)品，不做定量測定。
2. 當(dāng)樣本的病毒含量低于最低檢出限時，可能會出現(xiàn)假陰性。陰性結(jié)果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限，但不能完全排除病毒感染的可能。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1.準(zhǔn)確性：企業(yè)陽性參考品檢測結(jié)果全部為陽性，陽性率為15/15。
2.最低檢測限：該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。